Medium NA, PDA, dan LA adalah jenis medium umum yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme. LA dan NA digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Sedangkan PDA untuk menumbuhkan cendawan. Selain ketiga medium diatas, Kami juga mencantumkan medium trypticase soy medium (agar dan cair) serta medium Czapek Dox Agar.
Komposisi dan Cara Membuat Medium Pertumbuhan Bakteri
Komposisi dan Cara Membuat Medium NA
Medium NA dan NB adalah salah satu medium umum untuk menumbuhkan bakteri. Berikut bahan-bahannya:
Komposisi Medium Nutrient Agar (gram perliter)
| Komposisi | Jumlah |
| Peptone | 5 g |
| Yeast Extract | 2 g |
| Sodium Chloride | 5 g |
| Agar | 15 g |
| pH | 6.8 hingga 7.0 (Keasaman netral) |
Sumber : omicsonline – composition of nutrient agar medium
Semua bahan diatas dilarutkan dengan akuades dalam beaker glass atau gelas ukur lainnya, hingga volumenya mencapai 1000ml.
Komposisi Medium Nutrient Broth (gram per-liter)
| Ingredients | Quantity |
| Peptone | 5 g |
| Yeast Extract | 2 g |
| Sodium Chloride | 5 g |
| pH | 7 |
- Seluruh bahan NB diatas dilarutkan dengan akuades dalam wadah berskala hingga volumenya mencapai 1 L.
- Jika Anda menggunakan Medium NA/NB Instan, cara membuatnya dapat langsung ditimbang dan diproses sesuai instruksi produsen medium tersebut.
Komposisi Medium LB dan LA (Perliter)
- Tryptone 10% = 10 gram
- NaCl 10% = 10 gram
- Yeast extract 5% = 5 gram
- Agar 15-20% = 15-20 gram (untuk membuat medium LB Agar)
- Aquades ditambahkan hingga volume yang diinginkan
Jika Anda menggunakan Medium LA/LB Instan, cara membuatnya dapat langsung ditimbang dan diproses sesuai instruksi produsen medium tersebut.
Komposisi Medium Trypticase Soy Agar/Broth
| Pancreatic Digest of Casein | 17.0gm |
| Sodium Chloride | 5.0gm |
| Papaic Digest of Soybean Meal | 3.0gm |
| Dextrose | 2.5gm |
| Dipotassium Phosphate (K2HPO4) | 2.5gm |
- Final pH 7.3 +/- 0.2 pada suhu 25ºC.
- Tambahkan agar 1.5 hingga 4% jika ingin membuat TSA
- Aquades ditambahkan hingga volumenya mencapai 1000 ml
Komposisi Medium King’s B
Medium King’s B adalah medium pertumbuhan bakteri dari genus Pseudomonas.
| Proteose peptone No. 3 | 20 g |
| Glycerol/gliserin | 10 ml |
| K2HPO4 | 1.5 g |
| 5 ml larutan MgSO4 steril (1 M) | 1.5 g |
| Agar | 15 g |
| Akuades | 1 liter |
Cara Membuat Medium King’s B Agar:
- Campur semua bahan kecuali magnesium sulfat
- Panaskan bahan dengan penangas air atau heater berpengaduk hingga agar terlarut
- Atur pH hingga 7.0 – 7.2
- Tambahkan akuades jika volume berkurang
- Sterilkan dengan autoklaf
- Larutan magnesium sulfat ditambahkan ketika medium akan dituang
Cara Membuat Medium King’s B Cair:
- Campurkan semua bahan kecuali magnesium sulfat
- Tambahkan akuades hingga volume yang diinginkan
- Larutkan seluruh bahan dengan diatuk menggunakan batang pengaduk/magnetik stirrer
- Tambahkan
Komposisi Medium PCA
Plate Count Agar (PCA) adalah salah satu medium pertumbuhan mikroorganisme. Medium ini biasanya digunakan untuk menghitung viabilitas bakteri pada suatu sampel dengan metode total plate count (TPC). Medium ini juga dikenal sebagai Standard Methods Agar (SMA).
Komposisi dari medium PCA umumnya sebagai berikut:
| Bahan Medium PCA | g/L |
| Tripton | 5.0 |
| Yeast Extract | 2.5 |
| Glukosa/dekstrosa | 1.0 |
| Agar (Bacto agar) | 15 sampai 20 |
Cara Membuat Medium PCA
- Campurkan seluruh bahan pada wadah berskala
- Larutkan perlahan dengan 500 ml akuades (setengah volume medium yang diinginkan)
- Setelah larut, tera campuran tersebut hingga volume 1000 ml (hingga volume yang diinginkan)
- Medium bisa langsung disteril dengan autoklaf (121°C, 15 menit). Namun, disarankan memanaskannya terlebih dahulu hingga
agar terlarut. Indikatornya adalah larutan medium berubah jadi lebih bening. Tambahkan akuades jika volume menyusut - Medium dapat dituang ke dalam cawan petri steril setelah suhu-nya turun (sekitar 40 °C)
Komposisi dan Cara Membuat Medium Pertumbuhan Cendawan
Komposisi Medium Potato Dextrose Broth dan Potato Dextrose Agar
Medium PDA dan PDB adalah medium umum untuk menumbuhkan cendawan/jamur. Bahan-bahannya dapat berupa bahan-bahan segar dan bahan instan. Komposisi PDA dan PDB antara lain:
Bahan-bahan yang dibutuhkan untuk membuat 1 L PDB atau PDA adalah sebagai berikut:
- 200 g kentang kupas, diiris tipis. Diinfusi (rendam) dalam 500 mL air mendidih sambil diaduk. Diamkan beberapa saat (5 sampai 10 menit)
- Gula dekstrosa atau gula pasir sebanyak 20 g
- 20 g agar (untuk PDA)
- Asam tartar 10% atau asam laktat 85% steril terpisah
- Indikator pH universal
- Akuades ditambah hingga volume medium mencapai 1000 ml
Bahan-bahan PDA/PBD instan:
| Bahan | g/L |
| Dextrosa | 20 |
| Ekstrak kentang | 4 g* |
| Agar | 15-20 g |
* 4.0g ekstrak kentang setara dengan infusi kentang segar seberat 200 g
- pH akhir: 5.6
- Jika butuh medium yang asam, pH medium diatur dengan menambahkan 1-3 ml asam tartar 10% steril
sedikit-demi sedikit sesaat sebelum media dituang (final pH 3.5)
Antibiotik yang ditambah jika diperlukan:
- Chloramphenicol – 25 mg ( pH-5.6 +/- 0.2 at 25°C)
- Chlortetracycline – 40 mg
Jika Anda menggunakan Medium PDA/PDB Instan, cara membuatnya dapat langsung ditimbang dan diproses sesuai instruksi produsen medium tersebut.
Komposisi Czapek Doc Medium
| Bahan |
Kuantitas (g/l) |
| NaNO3 |
2.0 |
| KCl |
0.5 |
| Magnesium glycerophosphate (C3H7MgO6P) |
0.5 |
| FeSO4 |
0.01 |
| K2SO4 |
0.35 |
| Sukrosa |
30.0 |
| Agar (untuk membuat Czapek’s Doc Agar) |
12.0 |
| pH |
6.8 ± 0.2 @ 25°C |
- Tambahkan aquades hingga volume yang diinginkan
- pH dapat diasamkan dengan menambahkan 10 ml asam laktat 10% steril sebelum medium dituang atau digunakan
- Panaskan bahan medium agar terlebih dahulu hingga agar larut (medium berubah bening) sebelum disterilkan
- Jika volume berkurang saat medium pada dipanaskan, tambahkan akuades hingga volume yang diinginkan
2 pemikiran pada “Komposisi Media Pertumbuhan Mikroorganisme”