Medium Nutrient Agar & Nutrient Broth

5
(6)

Nutrient agar adalah medium yang diklasifikasikan sebagai medium sintetik terstruktur karena tersusun oleh komponen yang pasti jenis dan kuantitasnya. Medium Nutrient agar merupakan medium umum yang dapat digunakan untuk menumbuhkan dan menghitung populasi berbagai jenis bakteri.

Warna dari medium ini adalah kuning keemasan dan cenderung jernih. Medium NA memiliki pH 7.20 hingga 7.60 dan konsistensi yang cenderung padat, tergantung presentase agar yang ditambahkan.

Rangkuman Artikel Nutrient Agar dan Nutrient Broth

  1. Fungsi nutrient agar adalah untuk menumbuhkan bakteri, menghitung jumlah bakteri pada suatu sampel (metode total plate count)
    menyimpan kultur bakteri dalam waktu yang singkat, dll
  2. Fungsi dari nutrient broth adalah untuk menumbuhkan bakteri, meremajakan kultur dll
  3. NA dan NB yang dimodifikasi dengan indikator atau pengayaan tertentu dapat digunakan sebagai medium diferensial atau selektif
    untuk mendeteksi bakteri dengan kemampuan atau jenis tertentu. Misalnya, bakteri amilolitik dapat ditapis dengan NA yang ditambah dengan amilum
  4. Komposisi NB adalah (untuk 1 l): pepton 5 g, yeast extract 2 g, NaCl 5 g, dan aquades hingga volume 1000 ml
  5. Medium nutrient agar dibuat dengan menambahkan 15-20 g agar bacto pada bahan-bahan diatas, kemudian ditambah aquades hingga 1000 ml
  6. Fungsi bahan medium NA/NB: Pepton dan yeast sebagai sumber C dan N, dan vitamin. NaCl untuk menjaga keseimbangan osmotik

Fungsi Medium NA & NB

Fungsi utama dari media nutrient agar (NA) adalah sebagai medium kultivasi dan enumerasi (penghitungan) bakteri. Namun, dengan tambahan beberapa bahan seperti amilum (pati), serum, dan darah.

Medium nutrient agar juga dapat digunakan sebagai medium pengayaan dan selektif bagi mikroorganisme tertentu serta bermanfaat dalam uji serologi dan biokimia untuk mengidentifikasi bakteri.

Medium NA mengandung pepton, yeast dan beef extract yang berfungsi sebagai sumber nitrogen dan sumber karbon, sumber vitamin dan beberapa senyawa lain untuk menyokong pertumbuhan bakteri.

Pada medium ini terkadang juga ditambah dengan garam (NaCl) untuk menyeimbangkan tekanan osmotik sel bakteri dan medium, agar bakteri yang akan ditumbuhkan tidak mati.

Fungsi nutrient broth dan nutrient agar umumnya untuk meremajakan isolat dari stok penyimpanan atau untuk kultivasi sel (menumbuhkan kultur bakteri).

medium NA
Pertumbuhan bakteri pada medium NA (Dok. PPTI LIPI Biotek 2020)
medium Nutrient Agar cawan
Medium NA yang telah dituang dalam petridisk steril

Perbedaan Medium NA dan NB

Medium NA dan NB tidak memiliki perbedaan yang signifikan. Keduanya dibuat dengan bahan utama yang sama. Perbedaan keduanya hanyalah pada penambahan agar dan fungsinya. Perbandingan NA dan NB disajikan pada tabel berikut:

PerbandinganNutrient AgarNutrient Broth
Komposisi agar15g/l
Tipe mediumMedium padatMedium cair
Wadah yang digunakanCawan petri atau tabung reaksi (untuk slant atau tusuk)Dalam erlenmeyer, botol kultur atau tabung reaksi
FungsiMengamati atau menghitung koloniPeremajaan dan pemanenan sel/produk metabolisme bakteri

Komposisi dan Cara Membuat

Komposisi Medium Nutrient Agar (gram per-liter)

KomposisiJumlah
Peptone5 g
Yeast Extract2 g
Sodium Chloride5 g
Agar15 g
Beef extract1 g

pH: 6.8-7.2

Sumber : omicsonline – composition of nutrient agar medium

Semua bahan diatas dilarutkan dengan akuades dalam beaker glass atau gelas ukur lainnya, hingga volumenya mencapai 1000ml.

Komposisi Medium Nutrient Broth (gram per-liter)

IngredientsQuantity
Peptone5 g
Yeast Extract2 g
Sodium Chloride5 g
Beef extract1 g

Seluruh bahan NB diatas dilarutkan dengan akuades dalam wadah berskala hingga volumenya mencapai 1 L. Sesuaikan pH hingga 6.8 – 7.0.

Anda bisa menghitung bobot bahan yang Anda butuhkan menggunakan kalkulator NA/NB online berikut: Kalkulator bahan medium NA/NB.

Cara Membuat Medium Nutrient Agar (Media NA)

Cara membuat medium NA adalah sebagai berikut:

  1. Timbang semua bahan sesuai kuantitas yang dibutuhkan dan dilarutkan dalam sejumlah akuades sesuai jumlah yang diinginkan.
  2. Masukkan dalam wadah tertutup seperti botol kaca schott dan aduk menggunakan magnetic stirrer dengan suhu ± 200˚C dan kecepatan 300 rpm
  1. Medium NA diaduk dan dipanaskan hingga agar larut sepenuhnya atau medium telah bening
  1. Setelah agar larut, medium disteril pada autoklaf pada tekanan 1,5 ATM dan suhu 121˚C selama kurang lebih 15 menit.
  1. Setelah sterilisasi, medium dapat dituang secara aseptis pada cawan petri untuk penggunaan. Sebelum menuang medium, tunggu hingga suam-suam kuku (± 40˚C).
  1. Untuk membuat medium miring, NA yang telah dipanaskan langsung ditransfer pada tabung reaksi sebanyak ± 5 ml dan disumbat dengan kapas berbalut kasa sebelum disterilkan

Medium ini juga telah tersedia dalam bentuk bubuk instan yang telah mengandung semua bahan dalam tabel komposisi medium nutrient agar diatas.

medium NB
Pertumbuhan bakteri pada medium NA (Dokumentasi PPTI Biotek LIPI 2020)

Dengan medium instan ini, Anda dapat langsung melarutkan sejumlah bubuk media NA instan pada akuades.

Terdapat dua jenis medium instan yang beredar. Medium Nutrient broth dan medium nutrient agar instan. Berikut cara pembuatan NA dari kedua medium instan tersebut :

Pembuatan Media NA Instan

  • Timbang 20 g NA instan
  • Larutkan dengan 1 l akuades
  • Larutkan dengan penangas hingga larutan bening sambil diaduk sesering mungkin
  • Bagi dalam beberapa erlenmeyer
  • Sterilisasi dengan autoklaf selama 15 pada suhu 121 ˚C
  • Tuang medium pada cawan setelah suhu medium 50 ˚C

Cara membuat NB dan NA dari Medium NB Instan

  • Timbang 8 g medium NB instan
  • Larutkan dalam 1 l akuades
  • Bagikan larutan tersebut sesuai jumlah dan volume yang diinginkan
  • Tutup dengan penutup kapas/sumbat karet
  • Disterilkan dengan autoklaf

Untuk medium NA dari medium NB instan :

  • Timbang 8 g medium NB instan
  • Larutkan dalam 1 l akuades
  • Timbang agar sesuai persentase yang dibutuhkan
  • Bagikan larutan tersebut sesuai jumlah dan volume yang diinginkan
  • Tutup dengan aluminium foil dan lembaran plastik tahan panas
  • Disterilkan dengan autoklaf
  • Tuang pada petri dish sterile

Penyimpanan Medium NA/NB

Simpan medium selama 24 jam pada suhu ruang untuk memastikan medium tersebut memadat sempurna dan tidak ada kontaminan yang tumbuh. Jangan lupa melapisi pinggiran petri atau sumbat penutup dengan plastic wrap untuk mencegah kontaminasi.

Medium NA siap pakai dapat disimpan dalam suhu dibawah 30˚C (5-30 ˚C) dan digunakan hingga dua minggu. Medium NA yang telah melewati masa penyimpanan akan mengering, terutama pada medium NA dalam cawan petri.

Medium yang belum dituang dapat disimpan dalam lemari es (5 ˚C) hingga 1-2 bulan.

Video Cara Membuat Medium Nutrient Agar

Hal-hal yang Perlu Diperhatikan

  • Jika Anda memanaskan medium NA dalam wadah terbuka, pastikan Anda menambahkan 10% akuades lebih banyak untuk mengganti akuades yang menguap selama pemanasan.
  • Pastikan agar mencair dan tercampur rata. Agar yang tidak tercampur rata saat pemanasan akan mengakibatkan medium tidak dapat memadat saat dituang dalam petri
  • Medium NA yang langsung digunakan setelah sterilisasi kontaminannya tidak terdeteksi dan dapat mengakibatkan false positive
  • Jangan simpan medium NA cawan/miring dalam kulkas, karena suhu dingin dalam kulkas dapat memicu kondensasi dan pengembunan yang menyebabkan medium basah.

Sumber Pustaka

Himedia. 2003. Technical Data for Nutrient Agar. Mumbai: HiMedia Laboratories Pvt. Ltd.
Pengalaman pribadi

Kalkulator NA dan NB Online

Anda dapat menggunakan kalkulator NA dan NB berikut untuk menghitung bahan-bahan medium yang Anda butuhkan.

Klik link ini untuk mengakses kalkulator NA dan NB online: Kalkulator NA dan NB

Cara Membuat Medium Nutrient Agar (Media NA)

Cara Membuat NA Racik

Time needed: 2 hours and 10 minutes.

Cara Membuat NA Racik

  1. Timbang bahan NA racikan

    Hitung dan timbang bahan NA racikan sesuai volume dan resep. Gunakan kalkulator NA dan NB di atas!

  2. Campurkan bahan kering dengan akuades

    Campurkan bahan kering dengan akuades sesuai volume dan resep. Gunakan beaker glass berskala.

  3. Panaskan medium menggunakan heater

    Panaskan medium NA dengan heater. Aduk sesering mungkin dan jaga pemanas pada skala setengah dari panas maksimum.

  4. Tuangkan medium pada wadah yang diinginkan

    Setelah medium NA berubah menjadi jernih, tambahkan akuades sesuai volume yang hilang akibat penguapan. Setelah diaduk rata, tuangkan medium NA pada wadah yang diinginkan.

  5. Tutup wadah berisi medium

    Tutup wadah berisi medium dengan gumpalan kapas atau lembaran alumunium foil. Lapisi dengan kertas atau plastik tahan panas.

  6. Sterilkan dengan autoklav

    Sterilkan medium NA yang telah dibungkus menggunakan autoklaf pada suhu 121 °C selama 15-20 menit.

QnA Medium NA & NB

Apa itu NA dan NB?

Medium NA dan NB adalah medium pertumbuhan bakteri yang terbuat dari ekstrak daging sapi, pepton, NaCl, dan agar untuk NA. Medium ini termasuk medium umum bakteri dan telah diketahui komposisi dan jumlahnya telah terukur.

Bagaimana cara membuat NA/NB?

Cara membuat medium NA adalah sebagai berikut:
1. Timbang semua bahan sesuai kuantitas yang dibutuhkan dan dilarutkan dalam sejumlah akuades sesuai jumlah yang diinginkan
2. Masukkan dalam wadah tertutup seperti botol kaca schott dan aduk menggunakan magnetic stirrer dengan suhu ± 200˚C dan kecepatan 300 rpm
3. Medium NA diaduk dan dipanaskan hingga agar larut sepenuhnya atau medium telah bening
4. Setelah agar larut, medium disteril pada autoklaf pada tekanan 1,5 ATM dan suhu 121˚C selama kurang lebih 15 menit.
5. Setelah sterilisasi, medium dapat dituang secara aseptis pada cawan petri untuk penggunaan. Sebelum menuang medium, tunggu hingga suam-suam kuku (± 40˚C).
6. Untuk membuat medium miring, NA yang telah dipanaskan langsung ditransfer pada tabung reaksi sebanyak ± 5 ml dan disumbat dengan kapas berbalut kasa sebelum disterilkan

Apa fungsi medium NA?

Fungsi utama dari media nutrient agar (NA) adalah sebagai medium kultivasi dan enumerasi (penghitungan) bakteri. Namun, dengan tambahan beberapa bahan seperti amilum (pati), serum, dan darah.

Medium nutrient agar juga dapat digunakan sebagai medium pengayaan dan selektif bagi mikroorganisme tertentu serta bermanfaat dalam uji serologi dan biokimia untuk mengidentifikasi bakteri.

Apa saja komposisi NA/NB?

Dalam satu liter NA/NB mengandung bahan berikut:

NB: Peptone 5 g, Yeast Extract 2 g, Sodium Chloride 5 g, Beef extract 1 g.
NA: Peptone 5 g, Yeast Extract 2 g, Sodium Chloride 5 g, Beef extract 1 g, agar 15-20

How useful was this post?

Click on a star to rate it!

Average rating 5 / 5. Vote count: 6

No votes so far! Be the first to rate this post.

Topik Mikrobiologi Terkait:

Summary
Published On
Average Rating
51star1star1star1star1star Based on 3 Review(s)

1 thought on “Medium Nutrient Agar & Nutrient Broth”

Leave a Reply

Medium Nutrient Agar & Nutrient Broth

by Laila Karomah time to read: 5 min
1